蛋白定量的方法有很多種，應(yīng)用較多的主要有兩種：BCA蛋白定量檢測法和Bradford蛋白定量檢測法，市售的蛋白定量試劑盒也多基于上述兩種檢測方法而開發(fā)的。兩種方法均需配制蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，蛋白與定量試劑經(jīng)過一定時間的反應(yīng)（BCA法反應(yīng)為37℃、20-30min，Bradford法反應(yīng)一般為37℃，5min），酶標(biāo)儀讀取樣品的OD值，繪制的蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算WB蛋白的濃度。兩種檢測方法筆者均有使用經(jīng)驗，相比BCA法，Bradford法不僅節(jié)省反應(yīng)時間，也無需配置反應(yīng)試劑，簡單、快速、好用，筆者推薦Bradford法測定蛋白濃度。

嚴(yán)格來說，每次的蛋白濃度測定均需配制新鮮蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，保證每次測到的蛋白濃度的準(zhǔn)確性。然而，WB法評估蛋白表達(dá)水平本身就是一種半定量或者相對定量，因此在實際蛋白樣本準(zhǔn)本及濃度測定時只需保證均一性即可，即使用同樣的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算同一批蛋白的濃度，如果計算準(zhǔn)備即可保證蛋白上樣時內(nèi)參水平基本一致。因此，在實際操作中我們只需測定一次標(biāo)準(zhǔn)品的OD值、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可用此曲線來計算后續(xù)實驗蛋白的濃度，節(jié)省時間和試劑。

具體的蛋白定量步驟，各位朋友參考試劑盒提供的方法即可，簡單易行。至于標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，網(wǎng)絡(luò)亦可查到不是帖子介紹用不同軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。