蛋白表達是指用模式生物如細菌、酵母、動物細胞或者植物細胞表達外源基因蛋白的一種分子生物學技術(shù)。蛋白表達系統(tǒng)是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系,通過這個體系可以實現(xiàn)外源基因在宿主中表達的目的。
1、宿主。表達蛋白的生物體??梢詾榧毦⒔湍?、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性不同,適合表達蛋白的種類也不相同。
2、載體。載體的種類與宿主相匹配。根據(jù)宿主不同,分為原核(細菌)表達載體、酵母表達載體、植物表達載體、哺乳動物表達載體、昆蟲表達載體等。載體中含有外源基因片段。通過載體介導,外源基因可以在宿主中表達。
3、輔助成分。有的表達系統(tǒng)中還包括了協(xié)助載體進入宿主的輔助成分。比如昆蟲-桿狀病毒表達體系中的桿狀病毒。
蛋白表達對于表達不同的蛋白,需要采用不同的載體。目前已知的大腸桿菌的表達載體可分為非融合型表達載體和融合型表達載體兩種。非融合表達是將外源基因插到表達載體強啟動子和有效核糖體結(jié)合位點序列下游,以外源基因mRNA的AUG為起始翻譯,表達產(chǎn)物在序列上與天然的目的蛋白一致。融合表達是將目的蛋白或多肽與另一個蛋白質(zhì)或多肽片段的DNA序列融合并在菌體內(nèi)表達。融合型表達的載體包括分泌表達載體、帶純化標簽的表達載體、表面呈現(xiàn)表達載體、帶伴侶的表達載體。
蛋白表達優(yōu)點:遺傳背景清楚;繁殖快、成本低、抗污染能力強;表達量高、表達產(chǎn)物分離純化相對簡單、穩(wěn)定性好;商品化的載體和菌株種類非常齊全、適用范圍廣等。