噬菌體篩選技術(shù)的核心在于將外源基因插入噬菌體的結(jié)構(gòu)基因中,使其隨著噬菌體的傳代而表達。在不影響噬菌體外殼蛋白正常功能的前提下,外源蛋白以融合形式展示在噬菌體表面。這種展示方式使得外源蛋白能夠保持其相對獨立的空間構(gòu)象和生物活性,有利于靶分子的特異性識別及結(jié)合。
噬菌體篩選策略對于獲得高親和力的抗體至關(guān)重要。常見的篩選策略包括負向篩選、競爭篩選和交叉篩選等。
1.用于去除非特異性結(jié)合的克隆。例如,在使用鏈霉親和素磁珠對生物素化蛋白進行篩選之前,可以將文庫預先與鏈霉親和素磁珠和生物素化非目標蛋白結(jié)合,以減少不需要的結(jié)合物的比例。
2.在靶抗原和非靶抗原同時存在的情況下進行篩選,增加結(jié)合靶抗原特異性表位的抗體比例。
3.在不同輪次之間交替使用抗原進行篩選,以得到具有交叉反應的抗體。
噬菌體篩選的主要應用領(lǐng)域:
1.抗原表位分析:通過噬菌體展示技術(shù)可以篩選出抗原的表位,為疫苗設(shè)計和免疫治療提供重要信息。
2.單克隆抗體的制備:利用噬菌體展示技術(shù)可以快速獲得高親和力的單克隆抗體,用于疾病診斷和治療。
3.抗體人源化:通過該技術(shù)可以獲得人源化抗體,減少異源抗體在臨床應用中的免疫排斥反應。
4.藥物篩選:噬菌體展示技術(shù)可用于篩選新的藥物候選分子,特別是在治療性抗體的開發(fā)中發(fā)揮重要作用。
5.疫苗研制:通過篩選具有高親和力和高特異性的抗原表位,可以設(shè)計出更有效的疫苗。