單抗制備會(huì)由于亞克隆細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境不合適，導(dǎo)致融合細(xì)胞染色體丟失，分泌特性改變，親和力從高變低，這時(shí)就需要及時(shí)更換培養(yǎng)液，當(dāng)細(xì)胞增長(zhǎng)到一定密度的時(shí)候，培養(yǎng)基就開(kāi)始變顏色，影響融合細(xì)胞的生長(zhǎng)，造成染色體丟失；控制好細(xì)胞的密度，密度過(guò)大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗，影響融合細(xì)胞的生長(zhǎng)，造成染色體丟失；不要過(guò)于頻繁操作細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度不是很大的時(shí)候，不要頻繁操作，否則細(xì)胞容易出現(xiàn)死亡或者生長(zhǎng)形態(tài)發(fā)生明顯變化。

 

　　單抗制備為什么免疫后沒(méi)有效價(jià)或免疫后效價(jià)低？

　?。?）設(shè)計(jì)的抗原與被免疫的動(dòng)物內(nèi)源蛋白有同源性或者抗原是免疫原性極差的小分子物質(zhì)。對(duì)于前一種情況應(yīng)該重新設(shè)計(jì)抗原，設(shè)計(jì)抗原時(shí)盡量選取目標(biāo)蛋白特異性的序列，可以設(shè)計(jì)為短肽然后再與載體蛋白偶聯(lián)之后免疫；對(duì)于后一種情況，首先確認(rèn)小分子物質(zhì)是否已經(jīng)正確地和載體蛋白偶聯(lián)，如果偶聯(lián)沒(méi)有問(wèn)題，可以更換其它的載體蛋白，一般來(lái)說(shuō)KLH是所有載體中較為優(yōu)先考慮的蛋白。

　　（2）免疫的周期不正確。免疫周期過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，各免疫步驟之間的間隔過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短都有可能影響免疫效果，詳細(xì)請(qǐng)參考本站有關(guān)動(dòng)物免疫的部份，實(shí)際操作中的相關(guān)程序與本站推薦的程序相差盡里不超過(guò)50%的偏差。

　　（3）免疫佐劑不合適。在免疫時(shí)，對(duì)于某些抗原可能效果不佳，弗低佐劑也不能保證*有效，此時(shí)可以考慮更換佐劑嘗試。

　?。?）免疫劑量不合理。過(guò)大的免疫劑量可能導(dǎo)致免疫耐受，過(guò)少的免疫劑量可能無(wú)法激活免疫應(yīng)答。一般來(lái)說(shuō)，實(shí)際免疫劑量與本站所推薦的劑量不要相差兩倍以上。

　?。?）免疫途徑不合理。對(duì)于有些免疫原性弱的抗原，可以考慮脾內(nèi)免疫方法，具體操作本站上也有詳細(xì)的講解。

　?。?）測(cè)效價(jià)的過(guò)程存在錯(cuò)誤操作，尤其考慮包被是否成功或二抗使用是否正確。同時(shí)，一抗（即血清）稀釋梯度盡量放寬，一般建議從1：500或1：1000開(kāi)始作梯度稀釋。對(duì)于小分子物質(zhì)，效價(jià)達(dá)到1：2000仍可視為免疫成功。