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ARTICLES微衛(wèi)星分析服務(wù) 短串聯(lián)重復(fù)(Short tandem repeats, STR),又稱(chēng)微衛(wèi)星DNA(Microsatellite DNA)或簡(jiǎn)單重復(fù)列. (Simple repeat sequence, SRS或SSR),是廣泛存在于原核生物和真核生物基因組中的核苷酸重復(fù)序列。 由于微衛(wèi)星等位基因具有突變速率快、多態(tài)性高等特性,因此在生物遺傳作圖、群體遺傳研究、個(gè)體間親緣 關(guān)系鑒定等方面已得到廣泛
SNP/CNVIAFLP基因分型服務(wù) 基因分型(Genotyping) 是利用生物學(xué)檢測(cè)方法測(cè)定個(gè)體基因型(Genotype) 的技術(shù)。又稱(chēng)為基因型 分析(Genotypic assay)。
慢病毒構(gòu)建并包裝后,以進(jìn)行貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。具體流程如下: 1. 對(duì)慢病毒基因進(jìn)行改造,即敲除U3端的400bp的特定基因,使其逆轉(zhuǎn)錄和整合的能力,但保留產(chǎn)生病毒顆粒必須的蛋白的能力。 2. 向上述基因中插入目的基因。與具有包裝功能的質(zhì)粒同時(shí)進(jìn)行對(duì)包裝細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。在細(xì)胞上清中獲得攜帶目的基因的復(fù)制缺陷型慢病毒載體顆粒。
三種擴(kuò)大貼壁細(xì)胞培養(yǎng)的方法:維持其在培養(yǎng)皿表面(2D)的生長(zhǎng)狀態(tài),進(jìn)行傳代培養(yǎng)放大;進(jìn)行貼壁細(xì)胞分離,隨后在發(fā)酵罐的3D培養(yǎng)中進(jìn)行小試到大規(guī)模的逐級(jí)放大;采用含有微載體的攪拌發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)。2D培養(yǎng)即采用多培養(yǎng)皿或多層搖瓶進(jìn)行培養(yǎng)放大。
傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分,重新接種到另外的培養(yǎng)器皿(瓶)內(nèi),再進(jìn)行培養(yǎng)的過(guò)程。$n$n原理:細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后,已基本上飽和,為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng),同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大,須進(jìn)行傳代再培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以,而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。
細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞。因此,欲構(gòu)建細(xì)胞株,首先需獲得穩(wěn)定的細(xì)胞系。構(gòu)建流程如下: 1. 細(xì)胞培養(yǎng)(原核:大腸桿菌,真核:CHO細(xì)胞) 2. 質(zhì)粒的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。 3. 向轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)基中加入抗生素規(guī)定濃度的抗生素進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株篩選。 4. Western blot或ELISA檢測(cè)蛋白的表達(dá)情況,篩選比較高克隆進(jìn)行傳代并保存
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